細(xì)胞凋亡簡介
細(xì)胞凋亡分為病理性凋亡和生理性凋亡兩種,生理性凋亡由遺傳控制,受既定程序(或基因)調(diào)控,屬于程序性的細(xì)胞死亡;病理性凋亡是非遺傳控制的細(xì)胞的意外壞死,區(qū)別于細(xì)胞壞死。
流式細(xì)胞檢測(cè)原理
細(xì)胞凋亡時(shí)在細(xì)胞、亞細(xì)胞和分子水平上發(fā)生特征性改變。由于凋亡細(xì)胞核的改變,熒光染料對(duì)凋亡細(xì)胞的DNA可染性發(fā)生改變,主要是DNA可染性的降低。凋亡細(xì)胞形態(tài)的改變影響光的散射性,在流式細(xì)胞儀中,散射光有兩種:前散射光和側(cè)散射光,前散射光與細(xì)胞的大小有關(guān),側(cè)散射光與細(xì)胞內(nèi)顆粒多少有關(guān),反應(yīng)的是細(xì)胞內(nèi)光的散射情況。
Annexin-V是一種分子量在35~#6kDa的鈣離子依賴性磷脂結(jié)合蛋白,能與細(xì)胞凋亡過程翻轉(zhuǎn)到膜外的磷脂酰絲氨酸(phosphatidylserine PS)高親和力特異性結(jié)合,以標(biāo)記的FITC的Annexin-V作為探針,利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡。PI是一種核苷酸,它不能透過完整的細(xì)胞膜,但在凋亡的中晚期的細(xì)胞和死細(xì)胞,PI能夠透過而使細(xì)胞核染成紅色,將Annexin-V與PI匹配使用,可以將凋亡早期的細(xì)胞和晚期的細(xì)胞以及死細(xì)胞區(qū)分開。
實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)流程
1、收集細(xì)胞
2、洗滌細(xì)胞
3、預(yù)冷的70%乙醛固定細(xì)胞
4、PBS細(xì)胞重懸
5、細(xì)胞過濾
6、PI染色,4℃避光30min
結(jié)果判斷
PI用氬離子激發(fā)熒光,激發(fā)光波長為488 nm,發(fā)射光波長大于630 nm,產(chǎn)生紅色熒光分析PI熒光強(qiáng)度的直方圖也可分析前散射光對(duì)側(cè)散射光的散點(diǎn)圖。
檢測(cè)示例
客戶提供
1、實(shí)驗(yàn)信息,包括細(xì)胞類型,細(xì)胞處理藥物和條件。
2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果要求等。
服務(wù)流程
1、提交項(xiàng)目課題相關(guān)需求和資料。
2、與我們的專業(yè)技術(shù)團(tuán)隊(duì)討論項(xiàng)目細(xì)節(jié)。
3、根據(jù)討論后的意見對(duì)實(shí)驗(yàn)方案進(jìn)行修改。
4、雙方均滿意并達(dá)成一致,簽訂技術(shù)服務(wù)合同。
5、開展實(shí)驗(yàn),按期完成合同規(guī)定的內(nèi)容。
6、結(jié)題,提供實(shí)驗(yàn)原始結(jié)果和分析結(jié)果、實(shí)驗(yàn)流程、實(shí)驗(yàn)條件等等。
我們的優(yōu)勢(shì)
1、提供各種實(shí)驗(yàn)材料和儀器,滿足項(xiàng)目課題實(shí)驗(yàn)需要。
2、專業(yè)的操作人員。
3、高規(guī)格實(shí)驗(yàn)室。
4、數(shù)據(jù)結(jié)果交付周期快。
5、完善的服務(wù)體系,全程跟進(jìn),確保滿意。
咨詢與訂購
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